Hallmarks of liver lesions in pigs naturally infected by hepatitis E virus genotype 3 / Perfil das lesões histopatológicas hepáticas em suínos infectados naturalmente pelo genótipo 3 do vírus da hepatite E

Histopathological evaluation of liver from 33 pigs slaughtered for human consumption in Amazon region, previously tested by serology and molecular techniques for hepatitis E virus infection (HEV), was analysed in three groups: Group 1, negative for both HEV-RNA and anti-HEV IgG (n=10); Group 2, positive for HEV-RNA (n=13); Group 3, positive for anti-HEV IgG (n=10). Group 2 showed a significant difference among the groups for liver lesions such as lobular activity (P=0.007), periportal interface hepatitis (P=0.004), portal inflammation (P=0.028) hepatitis with lobular, portal and periportal interface activity (P=0.001). HEV detection by immunohistochemistry was performed and 3 of 6 samples of group 2 were positive. Pigs naturally infected by HEV genotype 3 present microscopic necroinflammatory liver lesions similar to HEV in humans. Liver histopathology showed be important in the diagnosis of active asymptomatic HEV infection in pigs slaughtered for human consumption because hepatic liver lesions may present distinct profiles according to molecular and serological diagnosis and in this sense, histopathology and immunohistochemistry may be an important complementary diagnostic tool.(AU)

A avaliação histopatológica hepática de 33 suínos abatidos para consumo humano na região amazônica, previamente testados para infecção pelo vírus da hepatite E (HEV) por sorologia e técnicas moleculares, foi realizada em três grupos: Grupo 1, animais negativos para HEV-RNA e anti-HEV IgG (n=10); Grupo 2, positivos para HEV-RNA (n=13); e Grupo 3, positivos para anti-HEV IgG (n=10). O grupo 2 apresentou diferenças estatísticas significantes entre os grupos em relação à presença de atividade lobular (P=0,007), hepatite periportal de interface (P=0,004), inflamação portal (P= 0.028) e atividade lobular acompanhada por inflamação portal e periportal de interface (P=0,001). A detecção imunohistoquímica do HEV foi realizada e três de seis amostras do Grupo 2 foram positivas. Suínos naturalmente infectados pelo genótipo 3 do HEV apresentam lesões necroinflamatórias no fígado similares a lesão em humanos. A histopatologia hepática demonstrou ser importante no diagnóstico de infecção ativa e assintomática por HEV em suínos abatidos para consumo humano, pois as lesões no fígado apresentaram perfis diferenciados de acordo com o diagnóstico sorológico e molecular da infecção e, neste sentido, a histopatologia e imunohistoquímica podem representar importantes ferramentas complementares de diagnóstico.(AU)

Challenges in research and management of hepatitis E virus infection in Cuba, Mexico, and Uruguay / Retos en la investigación y el tratamiento de la infección por el virus de la hepatitis E en Cuba, México y Uruguay / Desafios em pesquisa e tratamento da infecção pelo vírus da hepatite E em Cuba, ­México e ­Uruguai

ABSTRACT The symposium "Epidemiology of Hepatitis E virus (HEV) Infection and Associated Immune Response" was held at the Universidad de Guadalajara, Mexico, on 14 June 2017, to define the status of research on HEV infection in three countries in Latin America and the Caribbean (LAC)—Cuba, Mexico, and Uruguay—compared to the situation in Germany. Scientists identified specific research gaps in understanding HEV transmission and the resulting impact on development of disease in the three abovementioned LAC countries. Specific recommendations for implementing standardized serologic and molecular diagnostic methods and epidemiologic, basic, and applied research aimed to develop prevention and handling strategies for this infection, along with the associated comorbidities in the three LAC countries, were also discussed. Given similar demographic, sanitary, and economic conditions in other LAC countries that could predispose them to be at high risk for HEV transmission and infection, these research gaps and recommendations might apply to the entire LAC region. This report was ­prepared by meeting participants based on 1) symposium presentations, 2) literature reviews, and 3) group discussions.

RESUMEN El 14 de junio del 2017 se realizó en la Universidad de Guadalajara (México) un simposio sobre las características epidemiológicas de la infección por el virus de la hepatitis E (VHE) y la respuesta inmunitaria asociada. El objetivo fue definir el estado de las investigaciones sobre la infección por el VHE en tres países de América Latina y el Caribe —Cuba, México y Uruguay— en comparación con la situación en Alemania. Los científicos señalaron que para comprender la transmisión del VHE y la consiguiente repercusión en el avance de la infección en estos tres países latinoamericanos aún faltan investigaciones sobre ciertos temas específicos. También analizaron recomendaciones concretas para poner en práctica métodos estandarizados de diagnóstico serológico y molecular, y realizar investigaciones epidemiológicas, básicas y aplicadas a fin de elaborar estrategias de prevención y tratamiento de esta infección y las comorbilidades asociadas en los tres países antes mencionados. Considerando que otros países de América Latina y el Caribe presentan condiciones demográficas, sanitarias y económicas similares que podrían implicar una predisposición a un riesgo alto de transmisión del VHE y de infección por este virus, este análisis sobre las brechas y recomendaciones en el ámbito de la investigación podría aplicarse en toda la subregión. El presente informe fue elaborado por los participantes del simposio sobre la base de: 1) presentaciones del simposio; 2) revisiones bibliográficas; y 3) debates en grupos.

RESUMO O simpósio Epidemiologia da infecção pelo vírus da hepatite E (HEV) e ­resposta imune associada foi realizado na Universidade de Guadalajara, no México, em 14 de junho de 2017, para determinar a situação da pesquisa em HEV em três países da América Latina e Caribe (ALC) - Cuba, México e Uruguai - em comparação à Alemanha. Os especialistas identificaram lacunas específicas nas pesquisas no que se refere ao entendimento da transmissão do HEV e ao impacto resultante do surgimento da doença nos três países da ALC mencionados. Também foram debatidas recomendações aos três países da ALC, especificamente implementar métodos sorológicos e moleculares padronizados de diagnóstico e realizar pesquisa epidemiológica, básica e aplicada visando elaborar estratégias de prevenção e de enfrentamento da infecção e das comorbidades associadas. Diante da semelhança das condições demográficas, econômicas e de saúde que poderia predispor outros países da ALC a um maior risco de transmissão e infecção de HEV, as lacunas em pesquisa e recomendações provavelmente se aplicam à toda a Região da ALC. Este relatório foi preparado pelos participantes do encontro embasado nas apresentações do simpósio, revisão da literatura científica e discussões em grupo.

Virus hepatitis E: presentación hepática y encefálica / Hepatitis E virus: hepatic and encephalic presentation / Vírus da hepatite E: apresentação hepática e encefálica

Resumen: La infección por el virus de la hepatitis E se presenta en la mayoría de los casos como cuadros autolimitados indistinguibles de una hepatitis a virus A. En determinados escenarios clínicos(embarazadas y pacientes con enfermedad hepática crónica) pueden determinar cuadros graves. Las manifestaciones extra hepáticas de la enfermedad son excepcionales, y en particular las neurológicas. Presentamos un caso de encefalitis aguda como manifestación de una hepatitis a virus E.

Abstract: The Hepatitis E virus infection is usually an acute self-limited disease, but in some clinical situations (pregnancy and chronic liver desease) may presented as failure. The extra hepatic manifestation are not common in particular de neurological ones. We describe a case with acute encephalitis as a presentation of a hepatitis E virus infection.

Resumo: Na maioria dos casos, a infecção do vírus da hepatite E é uma condição auto-limitante indistinguível do vírus da hepatite A. Em certas situações clínicas (mulheres grávidas e pacientes com doença hepática crônica), condições severas podem ser determinadas. As manifestações extra-hepáticas da doença são excepcionais e, em particular, neurológicas. Apresentamos um caso de encefalite aguda como manifestação do vírus da hepatite E.

Molecular detection of hepatitis E virus in feces and slurry from swine farms, Rio Grande do Sul, Southern Brazil / Detecção molecular do vírus da hepatite E em fezes e chorume de propriedades suinícolas, Rio Grande do Sul, Sul do Brasil

Hepatitis E virus (HEV) is highly disseminated among swine herds worldwide. HEV is also a threat to public health, since particularly genotypes 3 and 4 may cause acute hepatitis in human beings. No previous studies were done on the occurrence of HEV in environmental samples in Rio Grande do Sul, Brazil. In the present study, reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) was employed to detect the presence of HEV in swine feces and in effluents from slurry lagoons in farms located in the municipality of Teutônia, inside the area of swine husbandry in the state. Pooled fecal samples from the floor of pig barns from 9 wean-to-finish farms and liquid manure samples were collected from the slurry lagoons from 8 of these farms. From the pooled fecal samples, 8/9 were positive for the HEV ORF1 gene by RT-PCR; all the slurry lagoon samples were positive for HEV RNA (100%). The identity of the HEV ORF1 amplicons was confirmed by sequencing belonging to HEV genotype 3, which was previously shown to be circulating in South America.

O vírus da hepatite E (HEV) é altamente disseminado entre rebanhos suínos no mundo todo. O HEV é também uma ameaça à saúde pública, já que os genótipos 3 e 4 podem causar hepatite aguda em seres humanos. Não há estudos anteriores sobre a ocorrência de HEV em amostras ambientais no Rio Grande do Sul. No presente estudo, empregou-se transcrição reversa e reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) para detectar a presença de HEV em fezes de suínos e efluentes de lagoas de chorume em fazendas localizadas no município de Teutônia, representativo da região de maior produção de suínos no estado. Pools de amostras fecais foram coletadas a partir do chão de galpões de suínos provenientes de 9 propriedades de terminação; outra amostra de esterco líquido foi coletada das lagoas de chorume de 8 dessas fazendas. A partir das amostras fecais reunidas, 8/9 foram positivas para o gene ORF1 de HEV por PCR convencional; todas as amostras de lagoas de chorume foram positivas para RNA de HEV (100%). A identificação dos produtos de amplificação de HEV ORF1 foi confirmada por sequenciamento pertencente ao HEV genótipo 3, o qual foi previamente detectado na América do Sul.

Serological and molecular detection of Hepatitis E virus in pig farms of Antioquia / Detección serológica y molecular del virus de la Hepatitis E en cerdos de granjas antioqueñas / Detecção serológica e molecular do vírus da hepatite E em suínos no departamento de Antioquia, Colômbia

Hepatitis E virus (HEV) is the viral agent that produces most cases of acute hepatitis worldwide. Four genotypes and 24 subtypes of HEV have been identified. Presence of viral strains in pigs suggests this species is a reservoir for HEV. A case of Hepatitis E in humans has been reported in Antioquia, the largest pig producer and pork consumer province in Colombia. This study investigated the presence of HEV in pigs from several swine farms in Antioquia by looking for anti-HEV antibodies and viral RNA in pig feces. Serological tests were performed for detecting IgG and IgM anti-HEV. Molecular assays (RT-PCR) were also used for detecting the ORF-1 marker of HEV viral genome. These procedures were performed on 210 animals from 30 pig farms. Presence of antibodies and molecular analysis were organized by frequencies and analyzed using the R software (version 2.15.2). 100% of the samples were positive for IgG antibodies, while 57% of the samples were positive for IgM antibodies. According to the molecular analysis, 26% of pig feces had genetic material from HEV. This study demonstrates exposure and circulation of HEV in pig farms of Antioquia.

La Hepatitis E es una enfermedad producida por el Virus de Hepatitis E (HEV), considerado el agente vírico con mayor producción de hepatitis agudas alrededor del mundo. Se han determinado 4 genotipos y 24 subtipos de HEV. La presencia de cepas virales tanto en humanos como en otras especies, ha sugerido que existen reservorios animales para HEV, entre los cuales el cerdo juega un papel importante. En Antioquia se ha reportado un caso de Hepatitis E en humanos. Teniendo en cuenta que este departamento es el principal productor y consumidor de cerdos en Colombia, se investigó la presencia de este virus en los cerdos de diferentes granjas porcícolas, con el fin de determinar anticuerpos anti-HEV y RNA viral en heces porcinas. Para lograr esto, se realizaron pruebas serológicas para la detección de anticuerpos IgG e IgM anti-HEV, y pruebas moleculares (RT-PCR) para la detección del marcador ORF-1 del genoma viral de HEV. Estos procedimientos se realizaron en 210 animales de 30 granjas porcícolas de Antioquia. La presencia de anticuerpos y análisis moleculares en los cerdos, se determinaron por frecuencias y se analizaron mediante el software R versión 2.15.2. El 100% de las muestras fueron positivas para anticuerpos IgG; mientras que para anticuerpos IgM, los positivos representaron el 57% de las muestras evaluadas. El análisis molecular determinó que el 26% de los cerdos presentó material genético de HEV en sus heces. Esta información demuestra la exposición y la circulación de HEV en cerdos de las granjas evaluadas en municipios de Antioquia.

A hepatite E é uma doença produzida pelo vírus da hepatite E (HEV), considerado o agente virulento com maior produção de hepatites agudas ao redor do mundo. Tem se determinado quatro genótipos e 24 subtipos de HEV. A presença de cepas virais tanto em humanos quanto em outras espécies, tem sugerido que existem reservatórios animais para HEV, entre os quais o suíno tem grande importância. Em Antioquia tem se reportado um caso de hepatite E em humanos. Tendo de presente que este departamento é o principal produtor e consumidor de suínos na Colômbia, pesquisou-se a presença deste vírus em suínos de diferentes granjas suínas, com o fim de determinar anticorpos anti-HEV e RNA viral em fezes porcinas. Para lograr isto, realizaram-se testes serológicos para a detecção de anticorpos IgG e IgM anti-HEV e testes moleculares (RT-PCR) para a detecção do marcador ORF-1 do genoma viral de HEV. Estes procedimentos realizaram-se em 210 animais de 30 granjas suínas em Antioquia. A presença de anticorpos e as análises moleculares nos suínos, determinaram-se por frequências e se analisaram mediante o software R Versão 2.15.2. O 100% das amostras foram positivas para anticorpos IgG; enquanto que para anticorpos IgM os positivos representaram o 57% das amostras avaliadas. O analise molecular determinou que o 26% dos suínos apresentou material genético de HEV em suas fezes. Esta informação demonstra a exposição e circulação de HEV em suínos das granjas avaliadas em municípios de Antioquia, Colômbia.

Molecular characterization of swine hepatitis E virus from Southeastern Brazil

Despite serological evidences of presence of hepatitis E virus (HEV) in humans or other animals, until this study the virus had not been detected and molecular characterization of the isolate that circulates in Brazil had not been described. Thus, we collected stool samples of young pigs and tested for presence of HEV RNA by RT-PCR, using primers for partial amplification of ORF2 sequence. Phylogenetic analysis with sequence obtained from the amplified products revealed that the HEV isolate identified here was most closely related to HEV isolates of genotype 3, which is commonly detected in HEV infected pigs. Nucleotide sequence analyses carried out with the entire amplified fragment, ORF2/ORF3 overlapping and ORF2 non-overlapping sequences showed highest identities with the US isolate of genotype 3. Similarly, amino acid sequence analyses done with the entire amplified fragment, ORF2 non-overlapping, ORF2 and ORF3 overlapping sequences also showed highest identities with the genotype 3 isolate. Presence, in Brazil, of HEV of genotype 4, which also infects pigs, as well as HEV strains that infect humans still remain to be detected and characterized.

Apesar de evidências sorológicas da presença do vírus da hepatite E (VHE) em humanos ou outros animais, até o presente estudo o vírus não havia sido detectado e a caracterização molecular da cepa que circula no Brasil não havia sido descrita. Assim, amostras de fezes de porcos jovens foram colhidas e analizadas quanto a presença do ARN do VHE por RT-PCR, utilizando-se oligonucleotídeos para amplificação da seqüência parcial do ORF2 viral. Análise filogenética realizada com a seqüência obtida dos produtos amplificados revelou que a cepa encontrada apresentou relação próxima com cepas do genótipo 3 que são detectadas com freqüência em porcos. Análises das seqüências nucleotídicas realizadas com todo o segmento amplificado, com somente o segmento sobreposto do ORF2/ORF3 e aquele sem sobreposição do ORF2, em comparação com isolados de genótipos conhecidos, mostraram maior identidade com o isolado encontrado nos Estados Unidos (US) do genótipo 3. De maneira semelhante, análises da seqüência de aminoácidos realizadas com os mesmos segmentos também mostraram maior identidade com o isolado de genótipo 3. Presença ou não do vírus de genótipo 4, que também infecta porcos, ainda necessita ser verificada. Da mesma forma, cepas do VHE que infectam humanos ainda necessitam ser detectadas e caracterizadas.

Hepatite E: atualizaçäo / Hepatitis E: an Update

Após a identificaçäo dos vírus das hepatites A e B, novos casos de hepatites virais, de etiologia desconhecida, ainda surgiam em todo o mundo. A introduçäo de técnicas de biologia molecular nos estudos dos agentes virais tem possibilitado o conhecimento dos novos agentes envolvidos nesses casos. Dois agentes têm sua participaçäo comprovada em casos de hepatites näo A näo B, um de transmissäo parenteral (vírus da hepatite C) e outro de transmissäo entérica (vírus da hepatite E). O vírus da hepatite E (HEV) é um vírus RNA de fita simples, de forma esférica, e que, por sua semelhança morfológica, foi classificado como membro da família caliciviridae, mas devido à distância filogenética entre estes agentes, o HEV näo está atualmente classificado nesta família, näo pertencendo até o momento a nenhuma família de vírus já bem definida. Surtos e epidemias de hepatite de possível transmissäo entérica foram relatados já na década de 50 na Índia, porém a identificaçäo do agente responsável por estes casos só foi possível na década de 90. Nosso objetivo foi apresentar uma atualizaçäo de alguns dados disponíveis sobre a hepatite E em várias partes do mundo, inclusive Brasil

Hepatitis A and B viruses were identified a long time ago, but cases of hepatitis without markers of infection by these viruses have been described around the world. Molecular biology methods have been used to study other viruses involved in non-A, non-B hepatitis cases. Two agents have been associated with these cases, one parenterally transmitted (Hepatitis C Virus) and other enterically transmitted (Hepatitis E Virus). The hepatitis E virus (HEV) is a single strand RNA virus, shaped spherical and was primarily defined as a Caliciviridae member, but because of some phylogenetic diversity between these agents, HEV has not been classified yet. Hepatitis epidemic and outbreak transmitted by fecal-oral route had been described since 1950, but the identification was possible only in 1991. In this paper, we show na update about Hepatitis E Virus infection around the world, with a special focus on Brazil